流式細(xì)胞分析的臨床應(yīng)用日益廣泛，常用于淋巴細(xì)胞亞群分析、白血病免疫表型分析、腫瘤治療中的方案選擇及療效評(píng)估等。檢測(cè)的樣本多為外周血、骨髓、各種體液（如腦脊液、胸水、腹水）及人體的組織（淋巴結(jié)、脾臟、肝）。制備出合格的分散單細(xì)胞將極大促進(jìn)流式細(xì)胞分析的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化工作。接下來(lái)為大家介紹流式各種樣本制備的流程和關(guān)鍵注意事項(xiàng)，助您實(shí)驗(yàn)事半功倍！

一、外周血、骨髓樣本制備

① 樣本采集與保存：

使用EDTA或肝素抗凝，12h內(nèi)檢測(cè)可室溫保存，24-48h處理需4℃保存。

② 紅細(xì)胞裂解

取100-200μl抗凝全血/骨髓，加入2ml紅細(xì)胞裂解液，輕柔混勻，外周血室溫孵育裂解10min，骨髓裂解5-8min；特殊樣本可增加稀釋度或延長(zhǎng)裂解時(shí)間，加入PBS至滿管，300-400g離心5min，棄上清以終止裂解；重復(fù)PBS離心洗滌，去除碎片。

骨髓樣本粘稠需用PBS稀釋后再裂解；若紅細(xì)胞殘留，可重復(fù)裂解1次。

推薦使用商品化裂解液，不同品牌以具體說(shuō)明書為準(zhǔn)。

③ 抗體染色

胞膜表面染色：根據(jù)Panel用量加入5-20 μl不同熒光素標(biāo)記的抗體，避光室溫孵育15min，PBS離心洗滌后，重懸于PBS中，若不及時(shí)檢測(cè)，可加多聚甲醛固定后避光4 ℃保存，待上機(jī)檢測(cè)。

胞內(nèi)染色：按照不同廠家的說(shuō)明書，先標(biāo)記膜表面抗體，再添加破膜劑處理10min，后加入胞內(nèi)抗體，避光室溫孵育30min，洗滌后重懸。

④ 注意事項(xiàng)：

熒光染色過(guò)程可以有不同的流程順序：染色-裂解-洗滌，染色-裂解-免洗，裂解-染色-洗滌。不同的染色流程對(duì)流式樣本的熒光強(qiáng)度有明顯影響，根據(jù)多中心數(shù)據(jù)表明，染色后裂解繼而洗滌，可以改善FSC、SSC的CV，得到最高的熒光強(qiáng)度。

二 組織樣本制備

① 樣本采集：

新鮮組織樣本置于生理鹽水或PBS中，室溫保存，盡量在12 h內(nèi)處理樣本；若無(wú)法及時(shí)處理，4℃保存，保存時(shí)間最好不要超過(guò)48 h。

② 常用方法

③ 注意事項(xiàng)：

不同組織樣本根據(jù)不同檢測(cè)項(xiàng)目要求需選用不同的處理方法。

酶處理注意時(shí)間、PH值、濃度等影響，且根據(jù)組織類型選擇合適的酶。

三 體液樣本制備

① 樣本采集與保存：

收集的樣本至于肝素抗凝管，室溫保存需12h內(nèi)處理，若無(wú)法及時(shí)處理，4℃保存，保存時(shí)間最好不要超過(guò)48 h。

② 制備方法：

體液樣本離心5min，收集細(xì)胞沉淀，經(jīng)PBS離心洗滌，若懸液有沉淀，可經(jīng)200-300目濾網(wǎng)過(guò)來(lái)后再洗滌，最后用PBS調(diào)整至所需濃度備用。

③ 注意事項(xiàng)：

腦脊液需高速離心濃縮細(xì)胞，胸腹水血性樣本先裂解紅細(xì)胞。

使用錐形底離心管，輕柔吹打以防細(xì)胞丟失。

隨著技術(shù)發(fā)展，目前已經(jīng)有自動(dòng)化樣本處理儀如貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)CellMek SPS應(yīng)用于臨床，這類儀器的使用會(huì)大大提高檢測(cè)效率和分析精密度。各位感興趣的小伙伴如需了解更多詳細(xì)信息，歡迎聯(lián)系貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)技術(shù)支持和業(yè)務(wù)代表獲取詳細(xì)資料。